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武汉九院供卵试管_气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量
来源:http://www.hbnongyao.cn  日期:2022-10-26

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1.气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的原理:

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样品经酸水解后提取脂肪,其中-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)经酯交换反应生成甲酯,用气相色谱分离检测,保留时间表征,外标法定量。

二。气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的试剂和材料:

2.1氢氧化钾(KOH)。

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2.2盐酸(HCl)。

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2.3无水乙醚(C 2 H 5 OC 2 H 5)。

2.4乙醇(CH 3 CH 2 OH):体积分数 95%。

2.5石油醚:沸程30 ~ 60。

2.6正己烷(CH 3 (CH 2) 4 CH 3):色谱纯。

2.7甲醇(CH 3 OH):色谱纯。

2.8无水硫酸钠(Na 2 SO 4)。

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2.9试剂配制:氢氧化钾甲醇溶液(0.5 mol/L):称取2.8 g氢氧化钾,溶于甲醇中,定容至100 mL,混匀。

三。气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的标准溶液:

3.1标准:

3 . 1 . 1-亚麻酸甲酯(C 19 H 32 O 2):纯度 99.0%。

3.1.2 EPA甲酯(C 21 H 32 O 2):纯度 98.5%。

3.1.3 DPA甲酯(C 23 H 36 O 2):纯度 98.0%。

3.1.4 DHA甲酯(C 23 H 34 O 2):纯度 98.5%。

3.2标准溶液的制备:

3.2.1单一脂肪酸甲酯标准储备液(4.0 mg/mL):称取100.0mg亚麻酸甲酯、EPA甲酯、DPA甲酯和DHA甲酯标准物质于25.0 mL容量瓶中,分别溶解于正己烷中,定容至刻度,摇匀。该溶液应储存在-18的冰箱中。

3.2.2混合脂肪酸甲酯标准中间液(1.0 mg/mL):分别吸取2.50 mL脂肪酸甲酯标准储备液于10.0 mL容量瓶中,摇匀,这也是标准曲线的最高浓度,使用前配制。

3.2.3脂肪酸甲酯标准工作溶液:分别吸取0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL和4.0mL脂肪酸甲酯中间溶液于10.0 mL容量瓶中,用正己烷定容,浓度为0.040 mg/mL、0.080 mg/mL、0.10 mg/mL和0.20mg/mL。

四。气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA含量的分析步骤:

4.1样品制备:

4.1.1样品处理:

4.1.1.1样品:称取0.5克~ 2克(精确至0.001克)粉碎混匀的待测样品(含待测组分约5毫克/克~ 10毫克/克),加入8毫升水于50毫升比色管中,混匀后加入10毫升盐酸。

将比色管置于70 ~ 80水浴中,每隔5 min ~ 10 min用涡旋混合器混合。直到样品完全水解,大约需要40 min ~ 50 min。取出比色管,加入10 mL乙醇,混匀。冷却至室温后,将混合物转移至带塞的100 mL量筒中,用25 mL无水乙醚洗涤比色管数次,倒入量筒中。

用密塞振荡1分钟。加入25 mL石油醚,用密塞摇匀1 min,静置30min,分层,将吸出的有机层过滤到加有无水硫酸钠(约5 g)的浓缩瓶中。然后加入25 mL无水乙醚,密塞摇匀1 min,25 mL石油醚,密塞摇匀1 min,静置分层,将吸取的有机层用无水硫酸钠(约5g)过滤到浓缩瓶中,按“加入25 mL无水乙醚…,静置分层,过无水硫酸钠”重复操作一次,用旋转蒸发仪在45减压浓缩所有提取液至近干。将浓缩液在正己烷中溶解几次,转移至25 mL容量瓶中,定容,摇匀。根据步骤4.1.2进行甲酯化处理。

4.1.1.2油品:称取0.2g ~ 1g(精确至0.001 g)混合均匀的油品(含约10mg/g ~ 20mg/g待测组分)。)于25mL容量瓶中,加入5mL正己烷,轻轻摇动使其溶解,用正己烷定容至刻度,摇匀。根据步骤4.1.2进行甲酯化处理。

甲基化

吸取2.0 mL至10 mL待测液体(4.1.1.1,4.1.1.2)于带塞尺的试管中,加入2.0 ml氢氧化钾甲醇溶液,立即移至涡旋混合器中,摇匀5 min,静置5 min,加入6 mL蒸馏水,上下摇匀0.5 min,静置分层后,吸取下层液体。弃去后,用少量蒸馏水反复洗涤,用吸管弃去水层,直至洗至中性(若有机相有乳化现象,4000 r/min离心10 min),吸取正己烷层在电脑上测试。

5.气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的色谱条件:

色谱柱:键合交联聚乙二醇固定相,柱长30米,内径0.32毫米,膜厚0.5米或相当。

柱温箱温度:初始温度180,以10 /min升温至220,然后以8 /min升温至250,保温13 min。

进样口温度:250;注射量为1 L,分流比为201。

FID检测器温度:270。

载气:高纯氮气,流速1.0毫升/分钟,尾吹25毫升/分钟。

氢气:40毫升/分钟;空气流速为450毫升/分钟。

不及物动词气相色谱法测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA结果的计算:

移植后第一天不洗澡、洗澡、游泳、淋浴或使用卫生棉条,首次孕检前不发生性行为,不进行慢跑、有氧运动等运动,不搬运重物。可以卧床休息24小时再去上班,或者两天后适当运动。具体可以咨询医生或者咨询平台,比如塞莱斯汀等等。

黛云说你可以卧床休息,不要走太久,太累了不适合你。你应该像平常的孕妇一样注意你的饮食。


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